Topmusicanswers
Upravte teploty žíhání, protože vysoké koncentrace aditiv PCR nebo pomocných rozpouštědel oslabují vazbu primeru k cíli. Zvyšte množství DNA polymerázy nebo použijte DNA polymerázy s vysokou produktivitou.
...
- Chyby sekvence na koncích produktů PCR.
- Falešně pozitivní zesílení.
- Zdroje.
- K jakému běžnému řešení problémů může dojít v PCR?
- Proč moje PCR nefunguje?
- Co způsobuje rozmazání PCR?
- Co se stane, když je teplota žíhání příliš vysoká?
K jakému běžnému řešení problémů může dojít v PCR?
Průvodce řešením problémů s PCR
| Problém | Příčiny |
|---|---|
| Nízký nebo žádný výtěžek produktu PCR | Teploty žíhání a prodlužování programu termocyklerů nejsou optimální |
| V reakci chybí Taq polymeráza nebo jiná reakční složka | |
| Příliš nízká koncentrace primeru | |
| Cílová sekvence není v DNA templátu |
Proč moje PCR nefunguje?
Zapomenutí pouze jedné složky reakce PCR, ať už jde o DNA polymerázu, primery nebo dokonce templátovou DNA, bude mít za následek neúspěšnou reakci. Nejjednodušším řešením je reakci zopakovat. ... Pokud ani poté produkt PCR neexistuje, je pravděpodobné, že vaší reakci brání něco jiného.
Co způsobuje rozmazání PCR?
Kontaminace DNA, RNA ve vzorku DNA, vysoká koncentrace DNA v reakci PCR může způsobit rozmazání. ... Rozmazávání DNA obvykle způsobuje v rostlinách kvůli vysoké koncentraci templátové DNA.
Co se stane, když je teplota žíhání příliš vysoká?
Teplota žíhání byla příliš vysoká
Pokud je teplota žíhání příliš vysoká, primery se nemohou vázat na šablonu. Pravidlem je použít teplotu žíhání, která je o 5 ° C nižší než Tm primeru.
