Topmusicanswers
- Proč v PCR nedochází k amplifikaci?
- Proč se moje DNA nezesílila??
- Co se stane, pokud do PCR nejsou přidány primery?
- Jak opravíte nespecifickou amplifikaci v PCR?
Proč v PCR nedochází k amplifikaci?
Pokud je počáteční množství šablony příliš nízké, může dojít k nedostatečnému zesílení. Zvyšte počet amplifikačních cyklů v krocích po 5 nebo, je -li to možné, zvyšte množství šablony. Kontaminanty ve směsi dNTP mohou vést k neúplné nebo nesprávné amplifikaci nebo inhibici PCR. Používejte vysoce kvalitní dNTP.
Proč se moje DNA nezesílila??
1) můžete mít špatný design primerů nebo reakční standardizaci (Vyhodnoťte tedy návrh primeru a proveďte, jak již řekli jiní, gradientovou PCR k vyhodnocení různých teplot žíhání); 2) Žádná DNA (váš extrakční protokol mohl selhat), a proto se vaše primery mohou navzájem spojovat (nebo je amogovat).
Co se stane, pokud do PCR nejsou přidány primery?
Otázka: Pokud jste zapomněli přidat primery do své reakce PCR, co by se stalo a proč? 1. Vaše reakce by selhala, protože polymeráza Taq nemůže přidávat báze bez již přítomného malého kousku DNA. ... Vaše reakce by selhala, protože by neexistoval žádný enzym, který by mohl přidat nové nukleotidové báze.
Jak opravíte nespecifickou amplifikaci v PCR?
Pokud je koncentrace templátu vysoká, použijte méně cyklů a při nízké koncentraci templátu použijte více cyklů. 2. Doba prodloužení byla příliš dlouhá: Nadměrná doba prodloužení může umožnit nespecifickou amplifikaci. Obecně použijte prodlužovací čas 1 min/kb.
